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Análisis del haplotipo en portadores de la mutación 6857delAA en el gen BRCA2 en 4 familias con cáncer de mama u ovario hereditario

Haplotype of the BRCA2 6857delAA mutation in 4 families with breast/ovarian cancer

Berta Campos a, Orland Díez a, Carolina Álvarez b, Lorena Palma b, Montserrat Domènech a, Judith Balmaña c, Judit Sanz c, Amaya Ramírez c, Carmen Alonso c, Pilar Carvallo b, Montserrat Baiget a

a Servei de Genètica. Hospital de la Santa Creu i Sant Pau. Barcelona.
b Laboratorio de Genética Molecular Humana. Departamento de Biología Celular y Molecular. Facultad de Ciencias Biológicas. Pontificia Universidad Católica de Chile. Santiago. Chile.
c Servei d'Oncologia Mèdica. Hospital de la Santa Creu i Sant Pau. Barcelona. España.

Palabras Clave

BRCA2. Mutación recurrente. Haplotipo. Cáncer de mama hereditario.

Keywords

BRCA2. Recurrent mutation. Haplotype. Hereditary breast cancer.

Resumen

Fundamento y objetivo: Entre un 5 y un 10% de los cánceres de mama son de carácter hereditario y se conocen en la actualidad 2 genes principalmente responsables: BRCA1 y BRCA2. Pacientes y método: En el estudio genético de pacientes con antecedentes familiares de cáncer de mama/ovario hereditario realizado en 2 centros, en España y Chile, se identificó la mutación 6857delAA en el gen BRCA2 de 3 familias españolas y de una chilena. Se realizó el análisis del haplotipo en los portadores mediante 5 microsatélites que rodean el gen y abarcan una región de 6 cM: cen-D13S260, D13S1698 (BRCA2), D13S171, D13S310 y D13S267-tel. Resultados: Dos familias comparten la variante alélica de los 5 microsatélites estudiados. Los marcadores D13S260 y D13S267 difieren cada uno en una familia. No se identificó el haplotipo común en los no portadores de la mutación y su frecuencia fue menor del 10% en los cromosomas control. Conclusiones: Los resultados apuntan a la existencia de un ancestro común con la mutación, originada en el área de Cataluña. Teniendo en cuenta los movimientos migratorios desde España a Latinoamérica, la búsqueda en estos países de mutaciones aparecidas recurrentemente en España puede favorecer un análisis más racional, efectivo y de menor coste en dichos genes.

Artículo

La existencia de antecedentes familiares de cáncer de mama (CM) es uno de los principales factores de riesgo de desarrollo de la enfermedad. Aproximadamente de un 5 a un 10% de todos los casos de CM son debidos a predisposición hereditaria. Estudios epidemiológicos han demostrado la participación de al menos 2 genes de susceptibilidad: BRCA1 (17q21) (MIM 113705) y BRCA2 (13q12-13) (MIM 600185)1,2. Las mutaciones heredadas en ambos genes son responsables de una amplia proporción de casos (30-65%) en mujeres con extensos antecedentes familiares3.

Se ha identificado un gran número de mutaciones en la línea germinal de BRCA1 y BRCA24,5. En la mayoría de los casos se han descrito una sola vez, pero algunas alteraciones son mutaciones fundadoras para algunas poblaciones de origen étnico o geográfico específico6,7. Otras mutaciones se han identificado repetidamente en poblaciones con una historia común de movimientos migratorios, como es el caso de mutaciones de origen europeo halladas en familias residentes en Canadá y en EE.UU. Las mutaciones recurrentes son un reflejo de las estructuras poblacionales, el aislamiento geográfico o cultural y los movimientos migratorios a lo largo de la historia8,9.

En el presente trabajo estudiamos la mutación 6857delAA en el gen BRCA2 en 3 familias españolas y en una chilena, todas ellas con antepasados en Cataluña. La identificación de mutaciones recurrentes en poblaciones con una historia común de colonización o migraciones es útil para diseños más eficientes de búsqueda de mutaciones en genes complejos y para el asesoramiento genético en estos grupos.

Pacientes y método

Se analizaron los genes BRCA1 y BRCA2 en pacientes con CM e historia familiar de CM o cáncer de ovario (CO) en el Hospital de la Santa Creu i Sant Pau (SP) de Barcelona y en el Laboratorio de Genética Molecular Humana de la Pontificia Universidad Católica de Chile (CH). Ambos estudios fueron aprobados por los respectivos comités de ética y se obtuvo el consentimiento informado de los participantes.

La mutación 6857delAA (localizada en el exón 11 del gen BRCA2) se detectó y describió en primer lugar en 2 familias en SP10,11. En el análisis posterior de 230 familias con CM/CO hereditario se identificó una tercera familia portadora. En un estudio de 50 familias chilenas con CM/CO se detectó la misma alteración en una de ellas12. Las 4 familias tienen antepasados en Cataluña. En la figura 1 se muestra la distribución de los casos de CM, CO y otras neoplasias en cada familia, y el resultado del estudio genético de los individuos analizados.

Para determinar si la mutación 6857delAA presente en las 4 familias no relacionadas entre sí se había originado en un mismo cromosoma ancestral, se amplificaron mediante reacción en cadena de la polimerasa 5 marcadores microsatélites polimórficos que flanquean al gen BRCA2 en 13q12-q13: cen-D13S260, D13S1698, (BRCA2), D13S171, D13S310 y D13S267-tel. Los fragmentos amplificados se transfirieron a una membrana de nailon y se hibridaron con una sonda marcada quimioluminiscente (ECL system, Amersham, Aylesbury, Reino Unido). Las frecuencias de los distintos alelos de cada marcador se calcularon a partir de 100 cromosomas de población española sana, no portadores de la mutación.

Resultados

En las familias SP23, SP148 y CH se genotipificaron entre 3 y 6 miembros. En la familia SPE13 sólo se disponía de muestra del caso índice y se asumió el haplotipo coincidente con el de las otras familias. Las familias SP148 y SPE13 comparten la variante alélica de los 5 microsatélites (8-9-6-4-5) que se extiende en un intervalo de 6 cM, entre D13S260 y D13S267. El marcador D13S260 difiere del alelo 8 en la familia SP23 y el marcador D13S267 difiere del alelo 5 en la familia CH (fig. 1). No se identificó el haplotipo común en los no portadores de la mutación en las familias y su frecuencia fue menor del 10% en los cromosomas control.

Discusión

La mutación 6857delAA en BRCA2 se identificó de forma independiente en 4 familias con CM/CO en España y Chile. En estas familias pueden asociarse con dicha mutación 14 casos de CM, la mayoría diagnosticados antes de los 50 años (media de 47 años; extremos: 29-56). Los individuos portadores expresan una amplia variedad de fenotipos: desde CM precoz y otros tumores en una misma mujer, a CO, CM masculino o cáncer de próstata (fig. 1). El espectro de neoplasias y la distribución de los casos hacen pensar en la participación de factores exógenos, genes modificadores del riesgo u otros genes de predisposición en dichas familias.

Fig. 1. Análisis de 5 marcadores polimórficos que flanquean al gen BRCA2 en 4 familias portadoras de la mutación 6857delAA. Las barras negras representan los alelos que configuran el haplotipo común correspondiente al cromosoma portador de la mutación. Las familias SP148 y SPE13 comparten la variante alélica de los 5 microsatélites (8-9-6-4-5). El marcador D13S260 difiere del alelo 8 en la familia SP23 y el marcador D13S267 difiere del alelo 5 en la familia CH. Las barras blancas corresponden a haplotipos distintos, no portadores. Círculo: mujer; cuadrado: varón; barra diagonal: individuo fallecido; flecha: caso índice; +: individuo portador; ­: individuo no portador; CM: cáncer de mama; bCM: cáncer de mama bilateral; Ov: cáncer de ovario; otras neoplasias: panc: páncreas; leuc: leucemia; rect: recto; cer: cerebro; cv: cérvix; ut: útero; est: estómago; pl: pulmón; prt: próstata.

Los haplotipos observados revelan que todos los portadores presentan alelos idénticos al menos en 3 marcadores que rodean a BRCA2, lo que apunta a la existencia de un antepasado común en dichas familias. Las discrepancias en los 2 marcadores más alejados de BRCA2 en algunos individuos pueden deberse a recombinación o al fenómeno de slippage durante la replicación, por el que varía el número de repeticiones en la secuencia de ADN.

Los análisis de haplotipos pueden evidenciar el origen único de una mutación específica presente en distintas familias no emparentadas, cuyos antepasados pueden remontarse a un origen geográfico o étnico común. Según los datos recogidos en las respectivas historias familiares, las 4 familias analizadas proceden de la región de Cataluña. Nuestros resultados indicarían que todas ellas comparten un ancestro común con la mutación 6857delAA en BRCA2. Esta alteración no se ha descrito en otras poblaciones4. Se han identificado otras 2 mutaciones recurrentes españolas: la 330A * G en el gen BRCA1, presente en familias de origen gallego13, y la 9254del5 en el gen BRCA2, originada en el área catalano-levantina14. En ambos casos, el estudio de los haplotipos proporcionó evidencias de un ancestro común. Estos datos concuerdan con la existencia de una subestructura poblacional para los genes BRCA1 y BRCA2 en la Península Ibérica15. A pesar de que la frecuencia de estas mutaciones específicas es baja en la población estudiada, la búsqueda de las mutaciones 330A * G, 9254del5 y 6857delAA en primer lugar puede ser un procedimiento útil en el análisis molecular de familias con susceptibilidad al CM/CO procedentes de estas regiones.

En EE.UU. y Canadá se han observado múltiples mutaciones europeas, que reflejan las migraciones desde este continente a Norteamérica. En muchos casos, familias de Centro y Sudamérica pueden trazar sus orígenes hasta el período de la colonización española o, en épocas más recientes, hasta las corrientes migratorias desde diversas regiones de España. La identificación de la mutación 6857delAA en BRCA2 en una familia chilena de origen catalán y de la mutación 330A * G en BRCA1 en familias de Centro y Sudamérica y del área caribeña con ancestros gallegos4 ilustran fenómenos similares. Hasta el momento, apenas se han publicado estudios amplios de los genes BRCA1 y BRCA2 en Chile o en otras poblaciones latinoamericanas. Tan sólo un estudio en 51 pacientes mexicanas con CM reveló la presencia de 2 nuevas mutaciones16. Por lo tanto, teniendo en cuenta la gran heterogeneidad de alteraciones que pueden presentar estos genes y la laboriosidad que supone su detección, la búsqueda de mutaciones recurrentes originadas en España puede ser de utilidad al establecer algoritmos de análisis mutacional más racionales y menos costosos en dichas poblaciones.

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